人干擾素調節因子可與干擾素基因中順式元件結合,調控干擾素及干擾素激活基因(ISG)的表達。因此,干擾素調節因子在機體抗病毒感染、調控細胞生長等方面有重要意義。
應用雙抗體夾心法測定標本中人干擾素調節因子1(IRF1)水平。用純化的人干擾素調節因子1(IRF1)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入干擾素調節因子1(IRF1),再與HRP標記的羊抗人抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成黃色。顏色的深淺和樣品中的干擾素調節因子1(IRF1)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人干擾素調節因子1(IRF1)濃度。
使用人干擾素調節因子的注意事項如下:
1、試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
2、實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
3、不用的其它試劑應包裝好或蓋好,不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
4、使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
5、使用干凈的塑料容器配置洗滌液,使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6、洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
7、底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。
8、加入試劑的順序應一樣,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
9、按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。